亲和素-生物素系统，如何减低干扰，更好地应用于免疫检测

1. 什么是亲和以次-半乳糖系统对

（链霉）亲和以次-半乳糖是免疫样品里面中用的频谱扫描系统对。亲和以次是蛋清里面常见的胺基酸酶，由四个相同的亚基组合而成。每一个亚基都构成一个半乳糖融合碱基，因此一个意味著也就是说的亲和以次很难融合4个半乳糖。亲和以次与半乳糖具有并不强烈的亲和性，其解离常数大近是1.3*10-15M，是可知自然界里面最强的非二聚体相互作用之一。亲和以次的细胞内内部结构并不稳定，即使在ppm极较差8M的尿以次氢氧化钠里面，也很难维持内部结构的正确性，保持对半乳糖的亲和性。并且在融合半乳糖后，亲和以次-半乳糖内部结构的准确性进一步增强，研究表明，即使在ppm为8M的乙酸砜里面，亲和以次-半乳糖复合物即便如此很难稳定实际上。另外，亲和以次-半乳糖的融合与抗原-肝细胞的融合类似，有极高的依赖性，很难在繁复的氢氧化钠环境里面相互融合，因此，亲和以次-半乳糖系统对尤其应用在免疫样品里面。其里面应用最为尤其的方式将是将亲和以次特罗斯季亚涅齐在磁珠内层，半乳糖标有抗原。

△半乳糖磁珠，半乳糖化抗原免疫样品下面

2. 亲和以次，链霉亲和以次，以及里面性亲和以次

亲和以次酶是钠盐外膜，黏度近为67kDa，细胞内等电点近为10。由于细胞内等电点较高，在pH里面性条件下，亲和以次带电荷。并且亲和以次实际上糖类成分（主要由糖类和N-乙酰氨基组合而成的异质内部结构），更容易与细胞内层、碱基、凝集以次等化学物质激发非依赖性融合，造开销底过高的弊端。链霉亲和以次是由链霉菌里面隐含纯化出有的酶，与亲和以次类似，链霉亲和以次也由四聚体组合而成，每个单体都可以以极高的亲和性融合一个半乳糖。各有不同的是，链霉亲和以次没有糖链，黏度比亲和以次略较差，大近为53kDa，细胞内等电点在6.8~7.5之间，非依赖性表层也比亲和以次要小很多。

另外一种尤其使用的亲和以次是里面性亲和以次（NeutrAvidin）。里面性亲和以次具体是替换成糖链后的亲和以次，黏度近为60kDa，细胞内等电点为6.3。由于替换成了糖链，里面性亲和以次的非特性得到了极大的减较差，同时又移去了亲和以次对半乳糖极高的亲和性。

△几种亲和以次的性质对比

3. 半乳糖及其衍生命体内部结构

半乳糖又被特指维生以次H，或者维生以次B7，是一种盐类维生以次，其功能是在细胞内直接参与脂肪组织、糖、酶代谢等重要化学物质的生化中间体。半乳糖尤其实际上与动物肝、肾、细菌、牛乳里面。

△半乳糖分子内部结构图

半乳糖黏度近为244，很难以配体的形式，标有在抗原酶的内层，而不影响了细胞内的生命体活性。因此尤其应用领域酶标有，进而通过亲和以次-半乳糖系统对对标有酶开展分离、石英砂、样品。

今日通过各有不同的改造方式将，半乳糖有各种各样的衍生命体，半乳糖标有酶的技术也日趋成熟。半乳糖衍生命体内部结构之外由半乳糖星形内部结构，戊酸侧链，间隔螺旋，以及中间体羟基组合而成。其里面间隔螺旋的有别潮间带，长度对于酶的标有效率，标有后半乳糖与亲和以次后续中间体性有重要影响了。如链霉亲和以次与半乳糖融合碱基是一个柜子型号内部结构，浅层大近有0.9纳米。因此，半乳糖的间隔螺旋长度，直接影响了到标有在酶内层的半乳糖是否很难进入亲和以次中间体柜子里面。在某些应用里面，长间隔螺旋的半乳糖具有更高的分析灵敏度。

△半乳糖衍生命体内部结构下面

△中用半乳糖螺旋长及黏度

4. 半乳糖分心

生命体分心是亲和以次-半乳糖系统对样品里面由来已久的弊端。采行亲和以次-半乳糖系统对开展免疫样品时，如果待测样本里面存如果实际上高ppm的人体内半乳糖，将与半乳糖化抗原竞争融合亲和以次的融合碱基，进而影响了样品结果。

作为盐类B族人维生以次，半乳糖在细胞内主要经过脾脏代谢。也就是说人体脾脏里面半乳糖ppm范围大近在0.28~0.55ng/mL，更远较差于各类免疫样品催化剂盒里面声称的激发分心的半乳糖ppm。但是日常补充半乳糖的群体；也，根据一项统计数据，美国大近有15%的群体日常补充半乳糖。而一篇登载在ClinicalChemistry上的研究文献说明了，也就是说人在静脉注射100mg半乳糖后1.5天内，脾脏里面半乳糖ppm达到峰值，最少为762.52ng/mL，24天内后，ppm下降至最少71.59ng/mL，高于许多样品催化剂盒声称的半乳糖分心ppm下限。而且依据各有不同的半乳糖摄入量，以及各有不同样品催化剂的性能，静脉注射半乳糖后对样品的分心似乎持续至48天内。

△而出名系统对均受半乳糖分心统计分析。（注，为美国FDA登记项目）

由于之外不采行半乳糖亲和以次系统对，雅培的免疫样品催化剂一直以无半乳糖分心作为卖点之一。具体上在2011年登记的维生以次D样品催化剂里面，雅培采行了半乳糖标有的维生以次D作为竞争衍生命体，与鼠抗半乳糖抗原标有的吖啶酯作为标有物开展样品，因此也则会在一定高度上均受到半乳糖分心。

5. 抗半乳糖分心的原理

意味著所有采行亲和以次-半乳糖系统对的样品催化剂盒都则会均受到半乳糖分心。在此之前有几种原理可以减较差半乳糖分心，或者减低催化剂对半乳糖分心的耐均受性。

比较简单直接的原理是减低亲和以次的加入量，如加大亲和以次磁珠的ppm，以减低中间体制度化对半乳糖的载重，但是这种做法有时候则会增加催化剂的开销，而且改善的高度有限。另外一种有效的原理是提前将亲和以次组分和半乳糖化组分提前预混，让亲和以次到时与半乳糖化抗原中间体，进而缩减样本里面人体内半乳糖对中间体的分心。诊断催化剂盒一般是采行链霉亲和以次磁珠-半乳糖中间体制度化，因此在应付半乳糖分心的弊端上，而出名Corporation一直在创新进步，希望很难从技术上彻底应付这一弊端。例如，近日公布的一项专利说明了，某一Corporation诊断整合出有一种抗半乳糖分心的抗原，很难依赖性融合人体内半乳糖，而对标有在抗原内层的半乳糖不融合，因此可以作为抗分心组分添加至中间体制度化里面，通过融合样本里面人体内的半乳糖而缩减分心。另外一种原理是采行抗半乳糖抗原替代亲和以次类酶。如美国一家初创Corporation就整合出有了特定的抗半乳糖抗原，其对半乳糖的亲和性与亲和以次类酶相当，但是与人体内半乳糖的亲和性则要较差100万分。

-说明了-

虽然半乳糖分心一直实际上，也尚未得到完全应付。但是众多厂家即便如此在化学发光免疫样品里面使用（链霉）亲和以次-半乳糖系统对，一个原因是早期整合过程里面采行了此类模式，如果摈弃或相反这种模式，无异于更进一步整合催化剂，调整仪器系统对，并且必需更进一步开展登记申报，必需花掉大量的人力，以及消耗并不长的等待时间。另一个原因是采行这种模式很难简化催化剂整合生产流程，并且在一定高度上减较差催化剂开销。不管出有于何种原因，（链霉）亲和以次-半乳糖系统对即便如此尤其应用领域免疫样品里面，但是半乳糖分心是一个不容忽视的弊端。